Il telefilm si svolge tutto all’interno della vasta stazione spaziale Babylon 5, in orbita attorno al terzo pianeta della stella Epsilon Eridani, ed è l’ultima stazione a portare il nome Babylon dopo la distruzione delle prime tre stazioni Babylon e la scomparsa della quarta.
La costruzione della prima stazione Babylon inizia al termine di una devastante guerra tra l’Alleanza Terrestre e il popolo alieno Minbari, quando si vuole creare un luogo neutro tra le parti.
Nonostante la sua missione sia improntata alla pace e spiccatamente diplomatica, la stazione è al centro di intrighi politici e conflitti che sono l’oggetto degli episodi che compongono la serie.